Делу время

При интравитальном исследовании сосудов определяется направление кровотока в микрососудах, идентифицируются отделы (мелкие артерии — артериолы — прекапиллярные сфинктеры — капилляры — венулы — мелкие вены — шунты). Изученные таким образом сосуды фиксируют на месте осмиевым фиксатором, мгновенно останавливающим кровоток, обезвоживают обычным способом и только после этого участок ткани вырезают и заключают в эпоксидную смолу. Полученную пластинку с заключенной в ней тканью под контролем препаративного микроскопа разрезают на подходящие блоки (1X1 мм), которые нумеруют, приклеивают к цилиндрическим блокам и ультратомируют. Срезы изучают в электронном микроскопе. Важным элементом методики является идентификация участков микрососудистой сети на всех этапах подготовки материала. Для этого производят фоторегистрацию выбранного участка до фиксации, после фиксации и обезвоживания, после разрезания на блоки, что позволяет точно соотнести каждый блок с общей картиной сосудистой сети. Ясно, что для такого способа изучения подходят лишь такие органы и ткани, которые можно исследовать в интравитальном микроскопе и которые можно фиксировать на месте (без механических смещений).

30. Схема приготовления реплики для электронной микроскопии

В последние годы для изучения тонкого строения тканей и кровеносных сосудов все чаще применяется метод «замораживания — травления», или метод прямой репликации с поверхности разлома замороженных тканей (Bullivant, 1966; Nickel, 1969). Особенностью метода является отсутствие химической фиксации тканей. Тканевые кусочки замораживают в металлическом держателе, предварительно охлажденном жидким азотом. В специальном контейнере их переносят в вакуумную напылительную установку, где под слоем жидкого азота производят скол и на образовавшуюся поверхность после испарения азота и поверхностного слоя льда напыляют угольную и металлическую пленку, которую отделяют от ткани. Полученную таким образом реплику изучают в электронном микроскопе (рис. 30). Необходимо учитывать, что замораживание как метод фиксации нельзя пока считать идеальным, так как в процессе замораживания трудно избежать кристаллообразования.