Делу время

Электронная микроскопия в цитохимических исследованиях применяется как основной и как вспомогательный (контролирующий) метод. Как вспомогательный метод электронная микроскопия используется Для контроля состава и чистоты фракций, получаемых для биохимических исследований по методу фракционального или дифференциального центрифугирования. Собственно электронно-микроскопическая цитохимия, изучая «химическую морфологию» клетки на уровне субклеточных структур, является, с одной стороны, методом химического и биохимического анализа этих структур, а с другой — единственным методом изучения Пространственной (отчасти и временной) организации биохимических процессов и соответствующих функций.

Технический арсенал электронно-микроскопической цитохимии в настоящее время обширен и разнообразен (Geyer, 1969) включает в себя методы выявления различных ионов, микро и макромолекул, в том числе нуклеиновых кислот и ферментов. Однако далеко не все эти методы используются для изучения кровеносных сосудов и соответствующих вопросов по проблеме микроциркуляции. Лишь фосфатазная и АТФазная активность в стенке кровеносных микрососудов изучена более или менее подробно (В. А. Шахламов, 1969; Campbell, 1968; Marchesi, Barrnett, 1964). Большое внимание также уделяется исследованию полисахаридных покрытий клеток, в частности эндотелиальных (Luft, 1965, 1966; Shirahama e. a., 1972).

Сложность применения методов электронно-микроскопической цитохимии (н без того трудоемких из-за необходимости постановки разнообразных контролей) состоит в выполнении противоречивых требований: сохранить ультраструктуру, не изменив активности фермента; обеспечить проникновение в ткань компонентов реакции и не допустить диффузионного перераспределения в ткани определяемого вещества или конечного продукта реакции. При использовании химических фиксаторов эти условия, очевидно, в большинстве случаев невыполнимы. Поэтому необходимо с особой осторожностью относиться к получаемым результатам, особенно при ультраструктурной локализации микромолекул и ионов, при сравнительном изучении активности ферментов (больше — меньше) в условиях нормы и патологии.