Делу время

Белковые индикаторы с пероксидазной активностью значительно различаются по размеру молекул (см. табл. 3), но все — от каталазы до микропероксидазы — выявляются в тканях одним и тем же техническим приемом: гистохимической реакцией на пероксидазную активность. В историческом плане родоначальником этой группы является растительная пероксидаза, получаемая из хрена. Она была введена в электронно-микроскопическую практику Karnovsky (1966), который широко использовал этот индикатор для изучения ультраструктурных основ сосудистой проницаемости.

Электронно-микроскопически в данном случае выявляются не сами индикаторы (как ферритин), а локализуются места их нахождения в тканях относительно тех или иных ультраструкур (межклеточных щелей, микровезикул и т. д.). Такой подХод позволяет использовать молекулы, размеры которых могут лежать за пределами разрешающей способности электронно-микроскопического метода. С другой стороны, малые количества фермента (даже единичные молекулы) способны переработать большое количество субстрата, переводя его в конечный продукт, выявляемый электронно-микроскопически. Это значительно повышает чувствительность методики: можно вводить небольшие количества индикаторного фермента и за счет эффекта «усиления», степень которого определяется объемом переработанного субстрата, выявлять местонахождение даже единичных молекул индикатора. Однако это справедливо лишь в тех случаях, когда отсутствует диффузия конечного продукта и все компоненты реакции достигают фермента, где бы тот ни находился (на поверхности клеток, в цитоплазме, в цитоплазматических органеллах и пр.).