Делу время

Собственная пероксидазная активность эндотелиальных клеток не мешает выявлению активности экзогенного фермента, так как она полностью угнетается длительной (2—3 ч) глютаральдегидной (или формальдегидной) фиксацией. Для выявления иероксидазной активности тканевые блоки, фиксированные альдегидными фиксаторами, замораживают и готовят срезы толщиной 40—50 мкм, которые инкубируют 15—30 мин при 37°' в реакционной среде. Среда содержит 5 мг диаминобензидина тетрахлорида, 0,1 мл 1% Н2О2 и 10 мл трисНС1буфера (0,05Мг рН 7,2). После инкубации срезы тщательно промывают в таком же буфере и фиксируют осмиевым фиксатором. Только после осмиевой фиксации продукт реакции становится видимым под электронным микроскопом благодаря высокой осмиофильности. Для выявления индикаторов с относительно низкой пероксидазной активностью (гемоглобин, миоглобин, цитохром С и др.) применяют среды с более высоким содержанием диаминобензидина и перекиси водорода, меняют рН и ионную силу.

Пероксидазные индикаторы в применяемых дозах и при коротких сроках циркуляции в крови не дают токсических эффектов, однако в отношении растительной пероксидазы обнаружено, что она может изменять сосудистую проницаемость, вероятно, путем влияния на тучные клетки (Cotran, Karnovsky, 1967). Показано, что этот эффект зависит от чистоты препарата (Оеmenti, 1970).